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葡萄糖脫氫酶(GCDH)測試盒測定意義：

GCDH(EC 1.1.1.47)催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，大量存在于高等動物的肝臟和弱氧化醋桿菌中。在低聚果糖生產(chǎn)中使用GCDH，不僅能去除低聚果糖中的葡萄糖提高低聚果糖的含量，而且生成的葡萄糖酸與鈣離子結(jié)合生成的是一種理

想的補鈣制劑。因而，GCDH已成為制備高含量低聚果糖的理想用酶。

測定原理：

GCDH催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，在340nm下測定NADH上升速率，即可反映GCDH活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入9.333 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1管，4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水，充分溶解。

標準品：粉劑×1瓶，臨用前加10 mL蒸餾水，充分溶解。1μmol/mL標準液，4℃避光保存。

測定操作：

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min，調(diào)節(jié)波長到570 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 空白管：取EP管，加入10μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A空白管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

3. 標準管：取EP管，加入10μL標準品，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A標準管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

4. 測定管：取EP管，加入10μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三和10μL試劑四，混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15 min，冷卻后反復顛倒EP管數(shù)次，于570nm測定吸光值，記為A測定管。顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

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